Диагностикум эритроцитарный дифтерийный антигенный жидкий

ФСП  42-0010-4099-03                                                      рег. № 002971/01

Применение.

Диагностикум представляет собой 3 % взвесь формалинезированных, танизированных         эритроцитов барана, сенсибилизированных очищенным концентрированным дифтерийным анатоксином.

Консервант – формалин.

Имеет вид гомогенной жидкости коричневого цвета. При стоянии разделяется на осадок, легко разбивающийся при встряхивании, и надосадочную жидкость.

Применение.

Препарат предназначен для определения уровня дифтерийного антитоксина в сыворотке крови человека в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) микрометодом и макрометодом.

Применение.

Определение содержания дифтерийного анатоксина в сыворотке крови человека осуществляют в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) микрометодом и макрометодом.

1.РПГА – микрометод.

1).В 12 лунок полистироловой пластины с V-образными лунками микротитратора системы Такачи или отечественного производства вносят по 0,025мл (1 кап) разведенного ФБР  с твином.

2).В первую лунку вносят 0,025мл разведенной в 5 раз испытуемой прогретой, адсорбированной сыворотки, тщательно перемешивают, получают разведение 1:10. 3).Переносят по 0,025 мл раствора из предыдущей лунки в последующую,  делают  двукратные разведения до 10 лунки включительно.

4).Из 10 лунки 0,25 раствора удаляют.

5).Флаконы с разведенным диагностикумом встряхивают до образования однородной взвеси и в каждую лунку вносят по 0,025 мл (одной капле) диагностикума.

Проведение реакции сопровождают следующими контролями:

1.      испытуемой сыворотки на отсутствие агглютининов к эритроцитам барана:

·        В 11 лунку каждого ряда вносят 0,025 мл испытуемой сыворотки, разведенной 1:5,прогретой, адсорбированной.

·         0,025 мл переносят в 12 лунку и добавляют в обе лунки по 0,025 мл разведенной в 8 раз 3% взвеси эритроцитов барана контрольных.   

2. контроль на активность диагностикума и отсутствие спонтанной агглютинации. РПГА проводят с  сывороткой противодифтерийной контрольной, разведенной в 100раз.

·        В 2 ряда по 12 лунок полистироловой пластины наливают по 0,025мл разведенного ФБР с твином.

·         В первую лунку каждого ряда добавляют по 0,025 мл разведенной сыворотки, получают разведение 1:200,содержимое лунок тщательно перемешивают и, переносят по 0,025 мл раствора из предыдущей лунки в последующую, делают двукратные разведение до 10 лунки включительно.

·         Из 10 лунки 0,025 раствора удаляют.

·        Флакон с разведенным диагностикумом тщательно встряхивают до образования взвеси эритроцитов и вносят по 0,025мл (1кап) разведенного диагностикума в каждую лунку до конца ряда. 11 и 12 лунки являются контролем диагностикума на отсутствие спонтанной агглютинации.

2.РПГА – макрометод

1). В 12 лунок полистироловой пластины наливают по 0,4 мл раствора разведенного ФБР с твином.

2).В первую лунку вносят 0,4мл разведенной в 5 раз испытуемой прогретой, адсорбированной сыворотки.

3).получают разведение 1:10,тщательно перемешивают и переносят по 0,4 мл раствора из предыдущей лунки в последующую, делают двукратные разведения до 10 лунки включительно.

4).Из 10 лунки 0,4 мл раствора выливают.

5)флакон с диагностикумом тщательно встряхивают до образования однородной взвеси эритроцитов.

6).Вносят по 0,05 мл 3% взвеси диагностикума в каждую лунку с разведенной сывороткой.

Реакцию сопровождают следующими контролями:

1.      испытуемой сыворотки на отсутствие агглютининов к эритроцитам барана:

·        В 11 лунку каждого ряда вносят 0,4 мл разведенной в 5 раз, прогретой, адсорбированной, содержимое лунки перемешивают.

·        Переносят по 0,4мл разведенного ФБР с твином.

·         В первую лунку каждого ряда добавляют по 0,4 мл разведенной сыворотки, получают разведение 1:200.

·        Содержимое лунок тщательно перемешивают и переносят по 0,4 мл раствора из предыдущей лунки в последующую.

·         делают двукратные разведения до 10 лунки включительно.

·         из 10 лунки 0,4 мл раствора выливают.

·        Флакон с диагностикумом тщательно встряхивают до образования однородной взвеси эритроцитов.

·        Вносят по 0,05мл диагностикума в каждую лунку до конца ряда. 11 и 12 лунки являются контролем диагностикума на отсутствие спонтанной агглютинации.

Пластины остаются на ровной поверхности в течение 2,5 – 3,5 часов при температуре от 20-22°С. Допускается учет реакции через 18-22 часов.

Учет результатов.

Реакцию агглютинации учитывают невооруженным глазом или с помощью агглютиноскопа по принципу «четырех крестов».

++++ - агглютинировавшие эритроциты ровным слоем выстилают все дно лунки, образуя по форме повернутый купол; края купола иногда заворачиваются

+++ - в верхней части агглютината отмечается более широкое плотное кольцо из эритроцитов барана, но меньшее по диаметру.

++ - в верхней части агглютината отмечается более широкое плотное кольцо из эритроцитов барана с признаками агглютинации по краю осадка.

 - - на дне лунки образуется плотный диск или плотное широкое кольцо с полностью гладким краем.

(Реакция должна быть отрицательной), если в лунках с контрольными эритроцитами отмечается реакция на «+» или на «++», необходимо провести повторную адсорбцию испытуемой сыворотки.

Форма выпуска.

Выпускают диагностикум в виде комплектов:

Комплект №1

    Для микрометода.  Рассчитан комплект  на 160 анализов. В состав комплекта входят:

1)   диагностикум эритроцитарный дифтерийный жидкий–2 флакона по 5,0 мл;

2)   эритроциты барана формалинизированные 50% - 2 флакона по 5,0 мл;

3)   эритроциты барана контрольные – 1 фл. - 5,0 мл;

4)   фосфатно-солевой буферный раствор без твина – 4 фл. по 3,2 мл;

5)   фосфатно-солевой буферный раствор с твином – 4 фл. по 6,4 мл;

6)   сыворотка противодифтерийная контрольная – 1 фл. - 1 мл.

 Комплект № 2

    Для макрометода – на 80 анализов. В комплект входят:

1)   диагностикум эритроцитарный дифтерийный жидкий – 5 фл. по 20 мл;

2)   эритроциты барана формалинизированные 50 %– 1 фл - 20 мл;

3)   эритроциты барана контрольные – 1 фл. - 20 мл;

4)   фосфатно-солевой буферный раствор с твином – 4 фл. по 6,4 мл;

5)   сыворотка противодифтерийная контрольная – 1 фл. - 1 мл;

Хранение.

Препараты хранят в защищенном от света месте при температуре от 2 до 8°С.

Срок годности.

1 год